培養(yǎng)基是影響體外培養(yǎng)細(xì)胞生長代謝、增殖乃至生存的直接和重要的環(huán)境因素。Vero細(xì)胞無血清培養(yǎng)的技術(shù)關(guān)鍵在于無血清培養(yǎng)基的設(shè)計(jì)和優(yōu)化。設(shè)計(jì)Vero細(xì)胞無血清培養(yǎng)基組成配方的技術(shù)核心是篩選和確定具有促進(jìn)細(xì)胞貼附生長、維持細(xì)胞存活、提高病毒擴(kuò)殖效果的培養(yǎng)基組成成分。

基于細(xì)胞生長和代謝的高通量分析及Plackett-Burman實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和Box-Behnken響應(yīng)面設(shè)計(jì)是Vero細(xì)胞無血清培養(yǎng)基設(shè)計(jì)和優(yōu)化的主要技術(shù)。Vero細(xì)胞的培養(yǎng)需要在適宜的介質(zhì)表面貼附、鋪展才開始有絲分裂、增殖，病毒的有效感染和增殖也有賴于細(xì)胞的貼附生長狀態(tài)。

此外，在某些病毒疫苗(如流感病毒疫苗)的生產(chǎn)過程中，需要在培養(yǎng)基中加人一定濃度的胰蛋白酶以提高病毒的感染和增殖效率。

另一方面，病毒的感染和增殖不僅是細(xì)胞代謝負(fù)荷不斷加大的過程，也是細(xì)胞病變、以致凋亡和壞死、甚至裂解的漸進(jìn)性過程。Vero細(xì)胞無血清培養(yǎng)基的設(shè)計(jì)和優(yōu)化相對(duì)于應(yīng)用于動(dòng)物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)工藝生產(chǎn)重組蛋白、特別是治療性抗體生產(chǎn)的無血清培養(yǎng)基更具挑戰(zhàn)性。

設(shè)計(jì)Vero細(xì)胞無血清培養(yǎng)基的較為便捷和有效的策略是以DMEM，F(xiàn)-12, M199和RPMI1640等商品化的合成培養(yǎng)基的單獨(dú)使用或聯(lián)合使用為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，以反映細(xì)胞生長和代謝的主要參數(shù)為評(píng)價(jià)指標(biāo)，結(jié)合統(tǒng)計(jì)學(xué)方法確定向其中添加生長因子、激素、結(jié)合蛋白及豁附因子、微量元素、脂類和脂類前體物等的種類和濃度。

締一生物為您推薦一款可用于Vero細(xì)胞無血清培養(yǎng)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，由HiMedia公司生產(chǎn)的SFRE199-1和SFRE199-2，是培養(yǎng)基M199的改良款。其改變了M199培養(yǎng)基的部分營養(yǎng)成分配方，主要在增加了氨基酸和葡萄糖的濃度，并加入硫酸鋅、丙酮酸鈉和魚精蛋白鋅胰島素。另外，還降低了硝酸鐵、黃嘌呤和碳酸氫鈉的濃度。SFRE 199-1有Hank's鹽；SFRE 199-2含有Earle's鹽，不含胰島素，可在使用前自行添加。

無血清培養(yǎng)基中常用的黏附因子主要是存在于細(xì)胞間質(zhì)和血清中的胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)蛋白，如纖粘連蛋白、層粘連蛋白、玻連蛋白和膠原等。其中，纖粘連蛋白和層粘連蛋白不僅具有提高細(xì)胞的砧附力及活力的作用，同時(shí)在促進(jìn)有絲分裂中也起著重要的作用。某些含有精氨酸一甘氨酸一天冬氨酸(RGD)序列的短膚也能夠有效地促進(jìn)Vero細(xì)胞貼附到以聚苯乙烯和醋酸纖維素為材料的介質(zhì)表面。

Vero細(xì)胞無血清培養(yǎng)基的優(yōu)化主要涉及以下兩方面。其一，從提高病毒疫苗安全性的需要出發(fā)，以非動(dòng)物來源成分替代動(dòng)物來源成分、化學(xué)組分明確成分替代化學(xué)組分不確定成分，其二，從提高病毒疫苗生產(chǎn)效率的目的考慮，根據(jù)細(xì)胞生長和代謝動(dòng)力學(xué)特征優(yōu)化培養(yǎng)基的組成。

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