現(xiàn)在，PCR試劑盒常用于各種檢測。其中di檢出限是PCR試劑盒一個重要的參數(shù)。PCRdi檢出限就是所能檢測到的靶標的di值。di檢出限的確定應(yīng)通過定量標準品來完成。定量標準品一般是經(jīng)過嚴格標定拷貝數(shù)的陽性DNA，梯度稀釋后進行一系列的檢測，每個梯度做8個復(fù)孔，終確定條帶能否觀測到或確定Ct值。

 示例. PCR定量標準品（支原體）（Minerva Biolabs）

接著可用Reed-Muench公式計算方法的檢測限（LOD50），lgLOD50=距離比例×稀釋對數(shù)質(zhì)檢的差+高于50%檢出率的稀釋度的對數(shù)。距離比例=（高于50%檢出率的百分數(shù)-50%）/（高于50%檢出率的百分數(shù)-低于50%檢出率的百分數(shù)）。也可使用Excel軟件在回歸分析中，自動計算LOD值（Data>Data Analysis>Regression，選中X，Y值）

PCRdi檢出限相當(dāng)于方法的靈敏度，它與DNA模板的質(zhì)量（包括是否有雜質(zhì)）、整個PCR反應(yīng)體系的性能優(yōu)化（包括反應(yīng)緩沖液、酶的功能、引物序列、引物濃度）、PCR程序條件的設(shè)定都有關(guān)系。有人采用巢式PCR，的確使得方法的靈敏度更高，但同時也增加了反應(yīng)的復(fù)雜性和反應(yīng)時間。

總之，PCR具有足夠低的檢測限，才能保證不會發(fā)生漏檢。因此，在方法學(xué)意義上，di檢測限應(yīng)受到足夠的重視。

參考文獻：

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