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雙重PDGFRα/β阻斷間質(zhì)重編程,Zell Shield助力細(xì)胞培養(yǎng)

更新時(shí)間:2024-07-14  |  點(diǎn)擊率:610

過量的間質(zhì)和癌癥相關(guān)成纖維細(xì)胞(CAF)促進(jìn)癌癥進(jìn)展并促進(jìn)免疫逃避。對(duì)基質(zhì)操縱免疫微環(huán)境的機(jī)制的深入了解有助于改善癌癥的治療。

 

發(fā)表在《Cancer Research》上,標(biāo)題為“Stromal Reprogramming through Dual PDGFRα/β Blockade Boosts the Efficacy of Anti-PD-1 Immunotherapy in Fibrotic Tumors"的研究,闡明基質(zhì)重編程和改進(jìn)癌癥免疫治療的潛在途徑。血小板衍生生長因子C (PDGFC)D的表達(dá)與胃癌患者的不良預(yù)后顯著相關(guān),PDGF受體β (PDGFRβ)在彌漫性胃癌間質(zhì)中主要表達(dá)。經(jīng)PDGFs刺激的CAFs顯示CXCL1、CXCL3、CXCL5CXCL8的表達(dá)顯著增加,這些細(xì)胞參與多形核髓源性抑制細(xì)胞(PMN-MDSC)的募集。纖維化胃癌異種移植腫瘤表現(xiàn)為PMN-MDSC積累增加,淋巴細(xì)胞浸潤減少,抗pd -1耐藥。單細(xì)胞RNA測(cè)序和空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)顯示PDGFRα/β阻斷通過基質(zhì)修飾逆轉(zhuǎn)免疫抑制微環(huán)境。最后,PDGFRα/β阻斷聯(lián)合抗pd -1治療可協(xié)同抑制纖維化腫瘤的生長。這些發(fā)現(xiàn)強(qiáng)調(diào)了間質(zhì)重編程對(duì)免疫再激活的影響,以及纖維化癌患者聯(lián)合免疫治療的潛力。

 

為了建立連續(xù)移植小鼠模型,科研人員將GAN-KP細(xì)胞皮下植入小鼠側(cè)腹。腫瘤細(xì)胞接種3周后處死小鼠。將含有各種非癌成分(如成纖維細(xì)胞)的腫瘤塊在1x TDR (BD Biosciences)中切碎并解離,在37°C下連續(xù)旋轉(zhuǎn)30分鐘。將樣品懸浮于含有2% FBS2 mmol/L EDTAPBS緩沖液中,將細(xì)胞懸浮液應(yīng)用于70 μm濾網(wǎng)。每個(gè)樣品中含有的紅細(xì)胞通過加入1ml VersaLyse (Beckman Coulter)溶解10分鐘,然后在緩沖液中冷卻。將微球鍍?cè)谀z原包被培養(yǎng)皿(IWAKI)上,用含有10% FBSZell Shield (Minerva Biolabs)RPMI1640培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)1周后皮下植入小鼠側(cè)腹。腫瘤細(xì)胞接種3周后處死小鼠。該過程作為連續(xù)移植方法重復(fù)進(jìn)行。

 

Zell Shield可以預(yù)防細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室的細(xì)胞支原體污染,方便高效。


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