長(zhǎng)鏈非編碼RNA (Long non-coding rna, lncRNAs)是數(shù)量最多、種類(lèi)很多的一類(lèi)非編碼RNA。它們定位于細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)或兩個(gè)區(qū)室，并通過(guò)多種機(jī)制在多個(gè)水平上調(diào)控基因表達(dá)。LncRNAs往往比蛋白質(zhì)編碼基因進(jìn)化得更快，并且具有更高的組織和發(fā)育階段特異性表達(dá)。lncRNA最初被認(rèn)為是錯(cuò)誤轉(zhuǎn)錄的副產(chǎn)物，沒(méi)有生物學(xué)功能，現(xiàn)在被認(rèn)為參與了許多生物學(xué)過(guò)程，如免疫反應(yīng)、細(xì)胞凋亡、多能性、重編程和分化。在這項(xiàng)研究中，我們重點(diǎn)研究了心臟制動(dòng)lncRNA 1 (HBL1)，這是一種近期報(bào)道的調(diào)節(jié)多能干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化過(guò)程的lncRNA。

近日，發(fā)表在《Scientifc Reports》上，標(biāo)題為：“Dynamic changes in LINC00458/HBL1 lncRNA

expression during hiPSC diferentiation to cardiomyocytes"的文章中，科研人員使用RT-qPCR和高分辨率RNA FISH來(lái)監(jiān)測(cè)分化過(guò)程中HBL1的表達(dá)和定位。研究結(jié)果表明，HBL1表達(dá)在中胚層和心臟中胚層階段顯著增加，在預(yù)期的分化細(xì)胞減少之前。在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中分別檢測(cè)到RNA的離散灶。在后一個(gè)隔間中，我們觀(guān)察到HBL1與Y-box結(jié)合蛋白1 (YB-1)共定位，這可能是RNA和蛋白質(zhì)相互作用的結(jié)果，因?yàn)樵?span>RNP-IP實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)兩者共免疫沉淀。最后，我們提供的證據(jù)表明，HBL1最初被報(bào)道為一個(gè)獨(dú)立的lncRNA基因，是LINC00458(也稱(chēng)為lncRNA-ES3或ES3)基因的一部分，形成一些LINC00458剪接異構(gòu)體的最后外顯子。

其中，科研人員將買(mǎi)來(lái)的內(nèi)皮祖細(xì)胞(來(lái)源于外周血)建立的人iPSC細(xì)胞系，于Essential 8™Flex培養(yǎng)基中，用重組人玻璃體連接蛋白(rhVTN-N)上進(jìn)行培養(yǎng)。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞中Oct3/4和Sox2的表達(dá)，用德國(guó)MB公司生產(chǎn)的Venor GeM qEP試劑盒檢測(cè)支原體的表達(dá)，檢測(cè)細(xì)胞的多能性水平。根據(jù)Ref.13發(fā)表的方案將hipsc分化為心肌細(xì)胞。簡(jiǎn)單地說(shuō)，用3 μM CHIR99021在CDM3培養(yǎng)基中(RPMI 1640中添加500 μg/mL重組人白蛋白和213 μg/mL l -抗壞血酸2-磷酸)處理90%融合度的hiPSCs 48 h。在CDM3培養(yǎng)基中處理24 h后，用4 μM IWR-1在CDM3培養(yǎng)基中處理48 h。細(xì)胞在CDM3培養(yǎng)基中培養(yǎng)48 h后，在添加B-27的RPMI培養(yǎng)基中培養(yǎng)。此外，在相同的條件下，從外周血單核細(xì)胞(PBMCs)重編程的另一種hiPSC系被培養(yǎng)和分化。